 Science Advances：13.6分 文章的出发点：常用的共刺激信号是CD28、41BB等，作者想拓展补充一些共刺激信号。之前的研究中TMIGD2这个分子在T细胞激活和分化过程中不可逆地减少，且TMIGD2阴性的T细胞表现出有害的表型变化，包括增殖减慢和衰老表型。此外，TMIGD2阴性T细胞细胞因子表达也会发生改变。这些发现表明，维持TMIGD2信号传导可能是一种有效的策略，可以通过防止衰老、减少增殖和改变细胞因子释放来支持CAR- T细胞效应功能。 文章大概内容：1.首先它构建了很多CAR结构，作用就是为了比较TMIGD2和其他之间的区别。用hEGFRt去代表表达效率，想发此类文章的可以看看怎么设置分组比较的。文章说他们的阳性率都在85%以上，这很高，看了一下他们的步骤，用的慢病毒，感染时用了RetroNectin试剂。 
2.接下来就是杀伤，他们用不表达CAR的T细胞，将上述分组的CAR阳比例都统一调成50%再去做实验。有一个有意思的点是，在实体瘤细胞系中，可以看到TMIGD2和41BB同时存在的CAR反而杀伤效果不太好，而在血液流细胞系中，TMIGD2和41BB同时存在的CAR效果还行。然后单独含有41BB的CAR效果反而不太好，这让我想起来之前好像有文献专门比较41BB和CD28的共刺激域，41BB也没这么差，后面找到文献了 
3.上面那个是最简单的杀伤效果，作者补充做了一个动态杀伤结果。   
4.CAR-T的细胞因子分泌也是一个衡量细胞毒性和杀伤作用，然后这里作者选择了一堆细胞因子去检测。总之，这些结果表明，B7-H3.TMI.ζ 和 B7-H3.28.BB.ζ CAR-T 细胞在体外表现出同等的细胞毒性反应和杀伤动力学。虽然这些 CAR-T 细胞的细胞因子分泌情况相似，但与 B7-H3.28.BB.ζ CART 细胞相比，B7-H3.TMI.ζ CAR-T 细胞分泌的这些细胞因子大多较少。 
5.体外的杀伤和细胞因子分泌做完了，那就做个动物的实验。这里可以注意到B7-H3.TMI.ζ 和 B7-H3.28.BB.ζ CAR-T 细胞效果差不多。（这边是静脉注射CAR-T） 
6.然后瘤内注射CAR-T的动物实验（这边是GBM模型），实验中有个现象，有小鼠在没有任何实质性肿瘤负担的情况下死亡，其根本原因很可能是 B7-H3.28.BB.ζ CAR-T 细胞而不是肿瘤细胞，所以B7-H3.TMI.ζ效果好，更安全。 
7.这里继续瘤内注射CAR-T的动物实验，不过这次是胰腺癌模型，结果依然是B7-H3.TMI.ζ效果好。 
8.动物体内的杀伤做完了，该检测CAT-T细胞的存活和扩增情况了。发现B7-H3.TMI.ζ-Luc CAR-T 细胞比 B7-H3.28.BB.ζ-Luc CAR-T 细胞在体内存活的时间更长。与 B7-H3.28.BB.ζ-Luc CAR-T 细胞相比，B7-H3.TMI.ζ-Luc CART 细胞的持久性略有提高。BB.ζ-Luc CAR-T在后期的持续性略有提高。  
9.然后作者比较了B7-H3.TMI.ζ 和 B7-H3.28.BB.ζ CAR-T 细胞在体外条件下的转录组差异。差异基因肯定能筛出一大堆，然后氧化磷酸化与糖酵解方面差异最大，表明这两种CAR- T细胞之间的代谢差异。 
10.测序测完了得验证一下，于是首先检测在共培养前后糖酵解和线粒体产生的 5′-三磷酸腺苷（%ATP）的变化。作者这里应该用的Seahorse的试剂盒，说实验结果符合转录组测序结果，然后又做了一系列跟代谢相关的实验，具体的不介绍了，感兴趣的自己看，结论是这些数据共同表明，B7-H3.TMI.ζ CAR-T 细胞不像 B7-H3.28.BB.ζ CAR-T 细胞那样依赖糖酵解途径。
11.肿瘤微环境在调节CAR- T细胞功能和表型方面起着重要作用，这可能对治疗反应产生深远的影响。所以，作者取小鼠体内的CAR-T细胞进行了转录组测序。结果是这些数据共同表明，B7-H3.TMI.ζ和B7-H3.28.BB.ζ CAR-T细胞在体内肿瘤微环境中的功能不同，与后者相比，前者表现出较少的糖酵解、较少的功能障碍和较少的免疫抑制表型。 
12.CAR-T持续接触抗原后出现一些情况，所以作者用肿瘤细胞持续刺激CAR-T细胞做了个对比，有以下几个结果 B7-H3.TMI.ζ CAR-T细胞比B7-H3.28.BB.ζ CAR-T在第13天和第17天获得的衰竭细胞更少。 B7-H3.TMI.ζ CAR-T细胞的CAR阳性率比B7-H3.28.BB.ζ CAR-T高（最开始两组细胞的CAR阳都是100%） 小鼠模型中取出瘤内CAR-T细胞中，B7- H3.TMI.ζ CAR-T 细胞中 LAG-3 的表达较低，而 PD-1 或 TIM-3 的表达没有差异。 从第 10 天开始，B7-H3.TMI.ζ CAR-T 细胞中的中心记忆细胞（CD45RA- CCR7+）较多，在第 6 天，情况正好相反（图 7C） B7-H3.TMI.ζ CAR-T 细胞中幼稚 T 细胞（CD45RA+ CCR7+）的比例较低。 效应记忆细胞（CD45RA- CCR7-）或终末分化的 EMRA 细胞（CD45RA+ CCR7-）在各组间没有差异（图 7C） B7-H3.TMI.ζ CAR-T细胞在第3天和第6天表现出更高的CD69+表达，在第10天表现出相同的表达，在第13天和第17天表现出更高的表达（图7C）。 TMI.ζCAR-T细胞与B7-H3.28.BB.ζCAR-T细胞相比，EMRA细胞数量呈减少趋势（P = 0.09）。 B7-H3.TMI.ζ CAR-T 细胞与 B7-H3.28.BB.ζ CAR-T 细胞相比，CD4+ T 细胞显著减少，CD8+ T 细胞显著增加。 还有一些细节性的差别这里就不记录了，总之B7-H3.TMI.ζ CAR-T 细胞在持续抗原刺激后获得的记忆、衰竭、活化和 CD8/CD4 表型存在差异。
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