NGS在噬菌体文库筛选上的优势？

实验室一直用噬菌体文库用于抗体的筛选和优化，经过多轮筛选后，挑选部分高亲和力的克隆进行Sanger测序，并得到最终序列用于下游实验。最近有不少文章提出利用NGS技术进行抗体噬菌体文库筛选工作，能够大大提升效率和发现率，有大神可以具体举例说明下吗？

对的，正如你所说目前基于NGS的方法正在日益取代Sanger测序在噬菌体文库筛选上的应用。下面以“High-throughput retrieval of physical DNA for NGS-identifiable clones in phage display library” 这篇文章为例说明。在这篇文章中，作者基于NGS测序开发了一个新的克隆鉴定的流程，TrueRepertoireTM， 能够提高高度准确的序列，同时包含抗体的重轻链信息。


下面流程图比较了传统基于Sanger测序方式与NGS测序方式的噬菌体抗体文库筛选流程。在传统流程中，先通过ELISA进行表型鉴定后在进行Sanger测序得到抗体序列。因为Sanger测序涉及到PCR扩展连转和挑斑测序，非常费人力和时间。而NGS方法可以直接先进行基因型测序，然后再进行表型验证，快速发现每一轮筛选后文库中的所有的富集抗体序列，包含低频的序列，最终再进行ELISA验证得到结果。




下面这张图解释了基于NGS方法能够获得更多的抗体序列，且这些序列大部分都是中低频序列，并且在后续的功能学验证上也是成功的。这些序列往往是Sanger测序所遗漏的。通常这些序列与新的表位有强的亲和力。这里就展示了NGS方法能够发现更多正确的抗体序列。